Procedimientos para el qPCR o RT-PCR

Procedimientos para el qPCR o RT-PCR

Bueno, espero que esto vaya funcionando. A continuación empezaré a describir como hacer un diagrama de flujo de está técnica que ahora tiene tanta aceptación. Lo que escribiré es basado en experiencia propia adquirida principalmente en los RML y un poco en USF. Por supuesto, lo escrito y descrito no es "fools proof" y está sujeto a mejorarse. También se aceptan sugerencias, comentarios, preguntas, etc. Iré escribiendo conforme pasen los días y también corrigiendo mis propios escritos. No tengo mucha experiencia en "blogging" pero no se gana más que haciéndolo.

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Iniciaré tomando en consideración el uso de RT-PCR para detectar la expresión de genes, para una revisión sencilla pueden ver este link de wikipedia, aunque es mejor buscar una revisión de revista científica.
Así pues, en este protocolo se pretende estudiar la expresión de un gen X en un organismo Z en una condición estándar comparada con un estrés nutritivo.
Aquí hay que tener en consideración incluir en el estudio un gen cuya expresión no cambiará, o se cree que no lo hará, en ambas condiciones. A estos se les ha mal llamado de "housekeeping" o constitutivo, pero en realidad es muy complejo considerar a un gen como constitutivo, pero eso puede dejarse a debate. De los genes más usados en bacterias están el que codifica para el rRNA 16S o el de la subunidad beta de la RNA pol (rpoB) entre otros. En eucariotes se han usado el que codifica para actina o para la G3PDH.
Bueno, ya elegido el gen a estudiar X y el control, pongamos actina, hay que diseñar los oligos para el estudio. Lo cual se vera en el siguiente blog.